8
當前位置：北京百奧創新科技有限公司>>代理>> PRS-ICM-CR原代腸癌條件重編程培養基
產品名稱：原代腸癌條件重編程培養基(Human intestine Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)
產品說明：原代腸癌條件重編程培養基（Human intestine Carcinoma Conditional Reprogramming Medium）是一種為促進人源腸癌原代細胞體外生長而開發的培養基。它是一種無菌的液體混合系統，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質和一定量的血清。培養基基于碳酸氫鹽的緩沖體系，在5%CO。、37℃培養箱中平衡時，pH值為7.4。該培養基的配方可以理想人源腸癌原代細胞體外培養環境，選擇性地促進體外人源腸癌原代細胞的生長。
產品優勢：
(1) 培養成功率高
(2) 體外持續擴增
(3) 保持腫瘤原始病理特征
(4) 藥敏結果宇臨床數據接近
使用說明：
?使用前準備
(1) 15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入生物安全柜中紫外照射30 min；提前30min從4 ℃冰箱取出原代細胞培養基平衡至室溫。
(2)γ 射線照射過的NIH-3T3細胞（40 Gy輻照）。
?腸癌原代上皮細胞培養
（1）獲取的人源腸癌原代細胞，按照表1中細胞數接種在合適的培養器皿中，加入y射線輻照后的NIH-3T3細胞（添加滋養細胞數量如表1和表2所示）。
（2）原代細胞初次接種后2-3天勿動（利于細胞貼壁），培養過程中若培養基顏色變黃但細胞未長滿時可進行半換液，鏡下觀察細胞未長滿但3T3細胞已不足時，適量補充γ射線輻照后的3T3細胞（一般補加初始數目的一半）。
注：針對實體瘤樣本，細胞粒徑大于12微米進行計數;倍增時間>48小時則定義為增殖較慢的細胞;對于增殖較快細胞，可以綜合倍增時間、接種器皿的規格以及培養周期來估算接種的細胞數量;表格供參考，具體實驗具體對待。
?腸癌原代上皮傳代
（1）鏡下觀察細胞形成克隆，且匯合度85~95%時即可傳代。
（2）培養箱中取出細胞，棄舊培養液，0.05%胰酶洗滌5秒后吸盡，再加入適量0.05%胰酶，37℃孵育，2~5 min后拿出輕拍培養瓶/板側面，顯微鏡下觀察細胞消化情況。
（3）細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用原代細胞終止培養基終止消化，并將細胞轉移至離心管中，1500 rpm,3min。
（4）棄上清，以1~5mL相對應的原代細胞培養基重懸細胞，活細胞計數，將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養瓶/板，加入γ射線輻照后的NIH-3T3細胞（不同規格培養瓶/板底面積、接種原代細胞數量、添加滋養細胞數量如表1、表2所示）。
（5）補加腸癌培養基至所需體積，十字交叉混勻，培養容器75%表面消毒后置培養箱，37℃、5%CO2條件培養。其他步驟同上。
注意事項：
本產品在使用前需平衡至室溫。
使用產品時應注意無菌操作，避免污染。
本產品中含有一定比例的血清和原代細胞專用抗生素，如無特殊需要不用額外再添加血清和抗生素，可直接使用。
樣本需為腫瘤組織、內鏡組織，且腫瘤細胞比例越高（>50%），培養成功率越高。
為保持本產品的理想使用效果，不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環境中。
傳代消化時切記不要消化過度，不宜超過5min，對細胞造成損傷，影響細胞狀態。
請于保質期內使用本產品，超出保質期，必須放棄使用。
本產品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。
